活血止痛胶囊主要有效成分是当归、三七等[以阿魏酸为指标,标准编号:WS3-084(Z-74)-95(Z)];作用是活血散瘀,消肿止痛。用于跌打损伤,瘀血肿痛。该品种主药成分阿魏酸含量测定方法是薄层扫描法,由于薄层扫描法测定操作繁琐且费时,给检验工作带来了不便,并且重现性差。作者通过查阅文献并加以摸索,建立了高效液相色谱法,本方法比薄层扫描法简便、准确并且结果满意。
1 仪器与试药
1.1 仪器
G1311A四元高效泵液相测定仪;G1314B紫外检测器;Agilent 1200色谱工作站;G1322A真空脱气机;G1316A柱温箱;CS-9301PC薄层扫描仪;Waters 2695高效液相色谱仪;BP 211D电子天平;BT224S电子天平。
1.2 试药
阿魏酸对照品(批号:110773-200611,中国药品生物制品检定所);活血止痛胶囊(批号:2007060103、20070709、20080906、20081103、20081206、20081219,珠海安生凤山制药有限公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯(Fisher);其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Agilent-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.085%磷酸(17:83);流速:1.0 ml/min;检测波长:316 nm;柱温:35℃;进样体积:10 μl。在该色谱条件下其对照品、供试品色谱图见图1,理论塔板以阿魏酸峰计在3 000以上。
2.2 对照品液的制备
取阿魏酸对照品约10 mg,精密称定,置50 ml棕色量瓶中,加70%甲醇溶液适量溶解,并加至刻度,摇匀。精密量取3 ml分别置于50 ml棕色量瓶中,加70%甲醇溶液至刻度,摇匀,即得阿魏酸对照品液。
2.3 供试品液的制备
取活血止痛胶囊10粒,装量差异检查后的内容物,精密称定,取约2.0 g(两份),精密称定,用70%甲醇溶液20 ml,精密称定,回流提取30 min,放冷,用70%甲醇溶液补足,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,即得。
2.4 线性关系考察
取阿魏酸对照品约10 mg,精密称定,置50 ml棕色量瓶中,加70%甲醇溶液适量溶解,并加至刻度,摇匀。精密量取1.0、1.5、3.0、4.5、6.0 ml分别置于50 ml棕色量瓶中,加70%甲醇溶液至刻度,摇匀,即得阿魏酸对照品溶液,分别取10 μl注入液相色谱仪中,对乙酰氨基酚进样量(X)在1.5～96.0 μg时与峰面积(Y)呈良好线性关系,经统计得回归方程:Y=51.288 1X-7.335 6(r=0.999 9)。结果表明阿魏酸在1.5～96.0 μg/ml浓度范围内,线性关系良好。
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