【准备】
(1)精子悬浮液:取正常新鲜精液,置室温液化 20min,加入 3~ 4倍量 10% 灭活兔血清生理盐水,充分混合后以 1000r/min,5min离心,去上清,沉渣以 10% 兔血清生理盐水溶液10mL 造成混悬液,如此洗涤 2次,尽量除去精浆,第 2次洗涤后的精子沉淀,用 10% 兔血清生理盐水溶液调整精子浓度为 40×106/mL,或者就在沉渣上面轻轻加入适量的 10% 兔血清生理盐水,静置室温,让活动精子上游,收集上层精子,调整浓度为 40×106/mL 备用。
(2)阴性对照血清:取未婚妇女血清,经 56℃ 30min 灭活处理后,预作精子制动化检测,证明无精子制动作用,以 0.5mL 量分装于小试管内,置 - 20℃ 中冻结保存,临用前取出一支溶解备用。
(3)补体血清:采用市售或自己制备的豚鼠血清。
【方法】
(1)A 小试管(试验管):加入灭活待检血清 0.25 mL,精子悬浮液 0.025 mL,补体0.05mL,充分混合后,置 32℃ 孵育 60min。
(2)B 小试管(对照管):加入对照血清 0.25mL,精子悬浮液 0.025mL,补体 0.05mL,混合后作同上处理。
(3)C 小管(患者血清对照管):目的是观察患者血清有无使精子出现非特异性制动作用。因此在 C 管中加入患者血清 0.25mL,精子悬浮液 0.025mL,但不加补体,混合后作同上处理。
(4)精子不动化值计算:孵育之后,分别从 A、B、C 管各取 1滴混悬液放在载玻片上,用显微镜(200~ 400× )观察活动精子数,具体可观察 4个视野,每个视野数 50个精子,总数中求出运动精子的百分率,即精子的运动率(% )。
【判断】
A 管的精子运动率为 T% ;B 管的精子运动率为 C% ;精子不动化值(sperm immobiliza-tion value,SIV)为 SIV =B 管 C%/A 管 T%=C/T≥2为阳性。
C 管只作为试验是否成立的判断,若 C 管出现制动作用,说明检体血清有非特异性制动作用,故试验不成立。
(实习编辑:黄秀杰)
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